Сиреневый дождь
Женский журнал: Ваш юрист, миграция, красота, кулинария, магия и многое другое.

Пцр-анализ: что это такое, показания и подготовка к исследованию

ПЦР-анализ: что это такое, показания и подготовка к исследованию

Метод полимеразной цепной реакции, или ПЦР, используется в лабораторной диагностике большинства инфекционных заболеваний.

Он позволяет обнаружить в исследуемом материале генетический материал микроорганизмов и таким образом идентифицировать их.

Что это такое

Метод был разработан в 1983 году, а в 1993 году его автор – Мюллис – получил Нобелевскую премию.

Основы метода

Каждый вид микроорганизмов, растений или животных имеет уникальный набор хромосом. Они образованы ДНК – дезоксирибонуклеиновой кислотой.

Мелкие фрагменты ДНК называются нуклеотидами, а их определенная последовательность составляет ген.

Каждый ген кодирует синтез одного белка, например, коллагена, альбумина и всех остальных. Последовательность нуклеотидов уникальна.

Для каждого вида живых организмов существуют общие участки ДНК, отвечающие за однообразие в пределах этого вида.

Анализ ДНК нескольких сотен микробов, попавших в материал для исследования, не позволит выявить видовые закономерности.

Необходимо во много раз увеличить количество значимых генетических компонентов, что даст возможность их идентифицировать.

Эту задачу и решает метод ПЦР.

Исследование относится к области молекулярной биологии.

К ДНК микроба добавляются ДНК-полимераза и свободные нуклеотиды.

Полимераза – фермент, обеспечивающий многочисленное копирование нужного участка из имеющихся нуклеотидов.

Запускают процесс праймеры – короткие нити рибонуклеиновой кислоты (РНК), прикрепляющиеся к началу нужного гена.

Процесс анализа состоит из нескольких фаз, каждая из которых требует определенного времени и температурного режима. В течение нескольких часов из тысячной доли грамма ДНК бактерий получается нужное количество материала для анализа.

Современная аппаратура дает возможность многократно копировать ДНК даже одной клетки, например, сперматозоида.

Ход исследования

  • взятие биологического материала (крови, мочи, влагалищных выделений, слюны и так далее) у пациента и доставка в лабораторию;
  • разделение двух нитей ДНК, переплетение которых образует хромосому, и очищение их от посторонних примесей;
  • удвоение нужного участка нити ДНК, в результате ее количество растет в геометрической прогрессии;
  • обработка полученного материала растворами, вызывающими специфическое свечение полученных фрагментов ДНК, по этому окрашиванию распознают, какая бактерия или вирус были в источнике; для разделения фракций ДНК используют электрофорез.

Длительность анализа составляет 4-5 часов.

Преимущества метода ПЦР

Полимеразная цепная реакция обладает такими преимуществами перед традиционными способами определения возбудителей инфекции:

  • прямое определение генов микроорганизма, в отличие от выявления антител к нему при многих других способах идентификации;
  • специфичность, то есть определение конкретного вида возбудителя;
  • чувствительность: для диагностики бывает достаточно даже одной клетки микроорганизма; в целом требуемое количество возбудителя в 10 раз меньше, чем для других методов;
  • универсальность биоматериала – исследуется не только кровь, но и клетки плотных тканей, соскобы с эпителия, слизистые выделения и любые другие среды, где может быть микроб;
  • скорость получения результата в несколько раз выше, чем при использовании других методов;
  • возможность распознавания хронических, вялотекущих и скрытых инфекций;
  • дезинфекция взятого у больного материала и исключение заражения сотрудников лаборатории;
  • полная автоматизация процесса исследования.

Недостатки анализа

Минусы ПЦР связаны в основном с ее технической сложностью:

  • необходимо правильно выбрать последовательности РНК – праймеры, а также приготовить смесь нуклеотидов для синтеза ДНК;
  • метод очень чувствителен, поэтому если в образце есть разные виды микробов, он может давать неверные результаты;
  • нужно тщательно очищать анализируемый материал от примесей белков человека и лекарств, так как они снижают точность диагностики;
  • требуется контрольное сравнение результатов с образцами, заведомо содержащими или не содержащими материал микроорганизмов, а также вообще не включающими ДНК для определения ошибок и загрязнений.

Ложноотрицательные результаты ПЦР вызваны нарушением техники анализа и изменениями в генетической последовательности любого из компонентов реакции.

Встречаются и ложноположительные данные – при случайном совпадении нуклеотидов праймеров и других применяемых реактивов с одним из генов микроорганизма.

Выделение микроорганизма не всегда говорит о том, что именно он стал причиной болезни. При анализе ДНК человека существует еще одна проблема: генетическая основа большинства заболеваний до сих пор неизвестна, что пока делает невозможной диагностику неинфекционной патологии на микробиологическом уровне.

Это направление медицинской генетики очень активно развивается.

Показания для ПЦР-исследования

Этот анализ используется в таких ситуациях:

  • необходимость выявления и идентификации вирусов, бактерий, простейших при любых инфекционных заболеваниях, когда требуется точность диагностики;
  • диагностика генетических заболеваний человека;
  • идентификация личности путем сравнения с генетическим материалом известного происхождения;
  • анализ тканей, полученных путем тонкоигольной биопсии, которые очень трудно исследовать другими методами;
  • диагностика лейкозов и злокачественных опухолей;
  • проведение экспериментов с приживляемостью эмбриональных стволовых клеток у животных (у людей применение таких клеток запрещено), а также выведение линий лабораторных мышей с заранее заданным генетическим заболеванием.

Перспективы применения ПЦР-реакции и ее разновидностей в медицине и биологии захватывают воображение – от испытания новых лекарств на генном уровне до создания трансгенных организмов с заданными свойствами.

Работы в этом направлении ведутся в крупнейших лабораториях мира, что помогает совершенствовать метод ПЦР и на прикладном уровне, для диагностики инфекционных болезней человека.

В медицине ПЦР-метод обычно используется для диагностики и оценки эффективности лечения таких заболеваний:

  • внутриклеточные инфекции, например, микоплазменная или хламидиоз;
  • болезни, передающиеся при сексуальных контактах;
  • туберкулез;
  • вирусные гепатиты и ВИЧ-инфекция;
  • инфекция Helicobacter pylori и многие другие.

Подготовка к исследованию

За 3 дня до выполнения исследования необходимо отказаться от употребления спиртных напитков.

По назначению врача отменяются некоторые лекарственные препараты, например, антибиотики.

Правила подготовки при диагностике половых инфекций:

  • за 2 дня до анализа прекратить половые контакты;
  • за 2 часа до исследования не мочиться;
  • накануне вечером и утром не спринцеваться; подмываться только теплой водой без моющих средств;
  • не сдавать ПЦР во время менструации и в течение 4 дней после кольпоскопии (у женщин).

Общие правила подготовки:

  • за 2 дня исключить интенсивные физические нагрузки, занятия спортом;
  • с утра в день исследования не курить и не употреблять пищу;
  • если материал будет браться из полости рта и носоглотки – утром не чистить зубы.

От выполнения этих простых правил зависит достоверность этого точного, но недешевого метода диагностики.

Самостоятельная интерпретация результата не даст нужной информации о болезни и ее лечении.

Вот поэтому после получения данных ПЦР-исследования необходимо обратиться к врачу.

К какому врачу обратиться

При подозрении на венерическое заболевание на ПЦР направляет гинеколог, уролог, андролог, венеролог. Исследование при гепатитах и ВИЧ-инфекции назначает инфекционист, при туберкулезе – фтизиатр.

ПЦР в своей практике используют врачи многих специальностей, например, онкологи, гематологи, гастроэнтерологи, генетики.

Этот сайт использует cookies для улучшения вашего опыта. Мы предполагаем, что вы в порядке с этим, но вы можете отказаться, если хотите. Принимаю ЧИТАТЬ ДАЛЕЕ: